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CAR-T生产工艺流程及优化考量(下)

发布时间:2020-08-11 10:34 信息来源: 阅读次数:

4.  CART细胞结构

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CAR结构包含
  1. 抗体的单链可变区(scFv)
  2. 非信号胞外区
  3. 与scFv链接的铰链区
  4. 跨膜区
  5. T细胞受体胞内CD3ζ
  6. 共刺激因子结构域



四代CAR的发展


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  • 第一代CART诱导T细胞激活仅通过cd3ζ信号域激活
  • 第二代CART中增加了共刺激结构域
  • 第三代CART增加两个共刺激结构域
  • 第四代CART增加酶、细胞因子和共刺激配体



5.  T细胞扩增

在CART细胞扩增过程中,细胞数量不断增加,培养基体积增大,必须通过更多或更大的组织培养瓶,这极大地复杂化了制造过程,并且它无法实现大规模的生产。

静态培养袋,允许较少的手动开放处理,管道连接可以使其在无菌条件下进行。

另一种方法 使用生物反应器,如Xuri细胞扩增系统和Wave生物反应器系统,利用灌注机制添加营养物质以及去除生长抑制物质,从而简化了制造过程。

6.  细胞因子刺激

细胞因子在工艺中使用,作为刺激信号,对于CART细胞质量,表型等产生重要影响。主要是γ链细胞因子:IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15, IL-21。常用IL-2 或者IL-7,同时使用/或者不适用IL-15.

诺华Yescarta使用IL-2,但是IL-2会导致分化和耗竭的T细胞表型。IL-7/IL-15可以增强T细胞活化和增殖,二者联合使用可以增加未分化CART(TN,TSCM)的存活和维持。单独添加IL-15也会增加耗竭表型,及抗凋亡活性。

和IL-2和IL-15比较,IL-21可以增加CD62L表达,增加抗肿瘤活性。

7.  抑制特定的信号通路


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主要靶向GSK3β, mTOR, AKT, 和PI3K:
  • GSK3β阻断T细胞分化,产生更多的TSCM




  • mTOR inhibitor rapamycin增加CD62L表达




  • 体外AKT抑制剂也表现出增加T细胞抗肿瘤活性




  • PI3K抑制剂idelalisib,降低调节性T细胞,逆转肿瘤免疫耐受,增加低分化CART细胞数量



8. 冷冻保存

冷冻保存CART细胞长达90天,不影响细胞的活力。使用前37℃过夜,可以恢复CART细胞活力。