细胞治疗产品安全性—RCL检测

      免疫细胞疗法广泛应用于临床，尤其是恶性肿瘤，是指采集人体自身免疫细胞，经过体外改造、培养，使其数量扩增或增加其靶向杀伤能力，然后再回输到患者体内，达到杀灭血液及组织中病原体、肿瘤细胞的目的。
     CAR-T细胞治疗技术因其安全性和广泛适用性，成为近年来一种发展较快的抗肿瘤治疗技术，但实际应用中，以逆转录病毒或慢病毒为载体的CAR-T细胞治疗产品，也仍然存在一定安全隐患，其主要原因在于，作为载体的逆转录病毒或慢病毒仍有可能产生具体有复制能力的病毒，即产生复制性逆转录病毒（replication competent retroviruses，RCR）或产生复制性慢病毒（replication competent lentivirus, RCL）。

逆转录病毒载体和慢病毒载体均为复制缺陷型载体，但在病毒载体生产过程中因穿梭载体、包装载体及包装细胞中的内源性逆转录元件之间，或病毒载体与免疫细胞的内源性逆转录元件之间发生同源或非同源重组，会导致可复制慢病毒(replication competent lentivirus，RCL)产生。鉴于RCL潜在的威胁，FDA及欧盟先后出台了相关文件，要求在生产及应用的不同阶段进行RCL的控制，包括生产病毒的细胞库、终末细胞、病毒载体及转导细胞，并对CAR-T细胞回输后的患者个体进行监测。

珈创生物构建了HIV-1弱毒质粒，包装了HIV-1弱毒作为RCL实验的阳性对照病毒，并对阳性对照与抑制对照中HIV-1弱毒的添加量进行摸索，使用合适添加量，以验证反应体系的适用性，又能监测反应灵敏度。同时，对供试品（慢病毒终末细胞、慢病毒上清液、CAR-T转导细胞）添加量也进行实验，以确保供试品不会明显影响C8166敏感细胞的增殖和感染。供试品在C8166细胞中经过扩增阶段和指示阶段的培养后，感染终点的细胞上清将进行p24 Elisa检测；同时细胞将用来提取DNA，进行psi-gag和VSV-G基因qPCR检测（引物探针由本公司自行设计）。本公司建立的RCL检测方法经过方法验证，可满足不同类型供试品的检测需求。