干货 | qPCR 实验中关于 CT 值问题的详细攻略（中）

NTC（无模板阴性对照）出现扩增一般会有两种情况：

（1）通过观察融解曲线，NTC 与目的基因融解曲线峰形不重叠。一般 NTC 的 Tm 值较目的基因 Tm 值小。

这种情况下，NTC 的 C_T 值是由引物二聚体造成的，并不影响目的基因 C_T 值的采集。

（2）NTC 与目的基因融解曲线峰形重叠。NTC 的 Tm 值等于目的基因的 Tm 值。

这种情况下，说明体系已被气溶胶污染了。那么，体系被污染，目的基因的 C_T 值还能正常使用吗？

需要计算目的基因的 C_T 值与 NTC 的 C_T 值的差值（△C_T）来判定。

若 △C_T ≥ 5，说明气溶胶带来的污染对体系影响非常小，可以忽略不计。

如果达不到 △C_T ≥ 5 的程度，△C_T ≥ 3 也可以认为气溶胶的污染程度很低，目的基因的 C_T 值可正常使用。

若 △C_T ＜ 3，说明污染已经很严重了，目的基因的 C_T 值是不能使用的。

未完待续...

转自：诺唯赞